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                      淺析ATCC細胞的復蘇和培養

                      時間:2022-09-23 點擊次數:166
                        凍存的ATCC細胞株和雜交瘤細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到凍存細胞后,可以立即解凍復蘇,去除二甲基亞砜(DMSO)后進行細胞培養。如果不立即復蘇培養細胞,必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層存儲。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低,達不到-130℃,細胞活力會迅速下降。
                        操作方法:
                        ATCC推薦在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發生。
                        檢查包裝,查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。
                        將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,立即復蘇培養,或迅速轉移放置在液氮罐氣相層在-130℃以下的溫度存儲。
                        凍存ATCC細胞的復蘇和培養:
                        1、先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,及產品說明推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。
                        2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待最后一塊小冰晶體剛融化,就應將細胞凍存管取出水浴。
                        3、在水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布拭干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
                        4、小心擰開凍存管的頂部,將管內容物用1ml移液槍轉移到含9毫升培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125xg),小心吸去上清液以去除抗凍劑(二甲基亞砜),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。
                        5、將細胞培養容器置于細胞培養箱,在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養條件下進行孵育。ATCC細胞培養24小時后應在顯微鏡下觀察細胞形態和生長狀況。

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