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                      細菌呼吸鏈復合物II活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)
                      時間:2021/9/7 點擊次數:732

                       細菌呼吸鏈復合物II活性比色法定量檢測試劑盒產品說明書(中文版)

                       

                      主要用途

                       

                        細菌呼吸鏈復合物II琥珀酸-輔酶Q還原酶)活性比色法定量檢測試劑是一種旨在使用合成輔酶Q同功類似物二氯酚靛酚通過反應系統測定樣品中二氯酚靛酚還原后吸光峰值的變化,即采用比色法測定樣品中酶活性的*而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的其適合于各種野生、培養或病原性細菌膜蛋白懸液樣品的琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異性活性檢測。產品不含污染性蛋白酶,嚴格無菌,即到即用,操作簡捷,性能穩定,反應優化,檢測敏感。

                       

                      技術背景

                       

                      細菌呼吸鏈復合II,通常稱為琥珀酸-輔酶Q還原酶或琥珀酸脫氫酶Succinate-Coenzyme Q OxidoreductaseSuccinate DehydrogenaseSQR),結構和功能上類同于線粒體復合物II,膜結合型,細菌需氧呼吸鏈與三羧酸循環鏈接的主要元素含有四個亞鐵硫中心(Fe-S clusters輔因子為黃素(flavin)。其最特征性的酶活性是噻吩甲酰三氟丙酮thenoyltrifluoroacetoneTTFA敏感的琥珀酸-輔酶Q還原酶。復合物II催化琥珀酸(succinate)被氧化為富馬酸(fumarate細菌內電子由供體黃素傳遞到內膜上輔酶Q受體(泛醌ubiquinone)的能量轉移反應,進行呼吸鏈傳遞基于琥珀酸底物,通過琥珀酸-輔酶Q還原酶的催化,氧化為富馬酸,同時氧化型二氯酚靛酚dichlorophenal-indophenolDCPIP轉化為還原型二氯酚靛酚dichlorophenal-indophenolDCPIPH2,在分光光度儀下產生吸光峰值的變化600nm 長),由此定量測定琥珀酸-輔酶Q還原酶的特異活性。其反應系統是:

                       

                       

                      產品內容

                       

                        緩沖液(Reagent A         毫升

                        反應液(Reagent B         毫升

                        陰性液(Reagent C           毫升

                        底物液(Reagent D          微升

                      產品說明書               1

                       

                      保存方式

                       

                      保存在-20冰箱里,避免反復凍融;  反應液(Reagent B)和  底物液(Reagent D),避免光照,有效保證6

                       

                      用戶自備

                       

                      比色皿:用于比色的容器

                      分光光度儀:用于比色分析

                      培養箱:用于孵育反應物

                       

                      實驗步驟

                       

                      實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的試劑溶液置入冰槽里融化;  緩沖液(Reagent A室溫預熱;  反應液(Reagent B  底物液(Reagent D注意避光。然后進行下列操作。

                       

                      一、 測定準備

                       

                      1. 準備好待測樣品(例如細菌膜蛋白樣品等),置于冰槽里 

                      2. 設定好分光光度儀(溫度為30℃):波長為600nm,間隔60秒,讀數6次(共5分鐘),并置零


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